Negatívna kontrola je dôležitá pri diagnostických PCR?

Negatívna kontrola je dôležitá pri diagnostických PCR?

Negatívna kontrola je dôležitá hlavne pri diagnostických PCR, kde prítomnosť DNA fragmentov v negatívnej kontrole spôsobuje nedôveryhodnosť pozitívnej reakcie aj u reakcií s prítomnou testovanou vzorkou DNA.

Ako je PCR citlivá na kontamináciu?

PCR je veľmi citlivá na kontamináciu, a preto sa pri príprave roztoku mastermixu vyžaduje veľmi precízna a sterilná práca, takže sa pracuje za tzv. "DNA-free" podmienok. Napokon sa do mastermixu pridáva vzorka DNA, ktorú chceme (resp. jej časť) amplifikovať. Nazýva sa aj templátová DNA (templát).

Kde začína exponenciálna fáza PCR?

Pre qPCR je práve kritický bod, resp. cyklus, v ktorom začína exponenciálna fáza, pretože vtedy množstvo amplikónu najlepšie odzrkadľuje vstupné množstvo templátovej DNA. Tento cyklus, kedy termálny cyklér zaznamená začiatok exponenciálnej fázy PCR, nazýva sa prahový cyklus a označuje sa Ct ( angl. treshold cycle) alebo Cp ( angl. crossing point).